Browsing by Author "Liu, Fangbing"

Now showing 1 - 1 of 1

Open Access
Monoclonal and recombinant antibodies to potyviral proteins and their application
(1999) Liu, Fangbing; Jeske, Holger (Prof. Dr.)
Ziel war es, Variable-Fragment-Einzelketten-Antikörper (scFv) gegen konservierte Aminosäuremotive der RNA-abhängigen RNA-Polymerase von Potyviren zu gewinnen. Die Expression der scFv-Gene in Pflanzen ist ein Weg zur Gewinnung von Kulturpflanzen, die resistent gegen Potyvirus-Infektionen sind. Die scFv könnten Anwendung bei der Diagnose von Potyviren finden. Folgende Ergebnisse wurden erzielt: 1. Vier monoklonale Antikörper (MAb), die gegen synthetische Peptide, die zwei der drei hochkonservierten Regionen des Kerneinschlussproteins b (NIb) von Potyviren widerspiegeln, gewonnen wurden, reagierten mit verschiedenen Potyviren. 2. Die Sequenz des NIb des potato Y potyvirus (PVY) sowie für eine synthetisches Protein, das aus einer Fusion aller drei hochkonservierten NIb-Regionen besteht, wurde in E. coli überexpremiert. Sie wurden für die Testung der Reaktivität der MAb genutzt. Das überexpremierte NIb wurde als Antigen für die MAb-Gewinnung eingesetzt. 3. MAb gegen das rekombinante NIb sowie das Hüllprotein (CP) des PVY wurden hergestellt. Es wurde gezeigt, dass sie PVY-Infektionen nachweisen können. Besonders der NIb-spezifische MAb 2E11 ist gut für diesen Nachweis geeignet. 4. Die Dynamik der Expression des CP und NIb des PVY in infizierten Nicotiana glutinosa und N. occidentalis wurde untersucht. Beide Proteine konnten in systemisch infizierten Blättern ab 5 dpi nachgewiesen werden. 5. ScFv-Antikörper gegen CP und NIb wurden aus Hybridomazellen, die MAb sekretierten, hergestellt. Die Expression des scFv 1D6F1, spezifisch für das PVY CP, erreichte ein Maximum von 17 vom gesamten löslichen Protein in E. coli. 6. Sowohl Phagen- als auch lösliche scFv-Antikörper zeigten ähnliche Bindungsaffinitäten mit den Ziel-Antigenen. Die Nachweisempfindlichkeit mit scFv war geringer als mit den Ausgangs-MAb. 7. ScFv-alkalische Phosphatase (AP) Fusionsproteine wiesen eine geringe Sensitivität auf, wahrscheinlich bedingt durch die niedrige enzymatische Aktivität der bakteriellen AP.