Erweiterung des genetischen Codes von Candida albicans zur Analyse von Protein-Protein Interaktionen in vivo

Abstract

In der vorliegenden Arbeit wurde der genetische Code des humanpathogenen Pilzes Candida albicans durch gezielte Etablierung und Optimierung eines orthogonalen Pärchens bestehend aus tRNA und tRNA-Synthetase um die synthetische Aminosäure p-Azidophenylalanin erweitert. Nach Integration der synthetischen Aminosäure in vivo und UV-Bestrahlung war eine positionsspezifische Kreuzvernetzung binärer Protein-Protein Interaktionen möglich, wie anhand von zwei Modellproteinen gezeigt werden konnte. Diese kreuzvernetzten Proteinkomplexe konnten zudem aufgereinigt und massenspektrometrisch analysiert werden, was eine generelle Eignung der Methode für die Indentifizierung auch unbekannter Interaktionen zeigte. Somit konnte ein wirkungsvolles Werkzeug für die Candida-Forschung etabliert werden.

In this work, the genetic code of the human pathogenic yeast Candida albicans was expanded with the synthetic amino acid p-azidophenylalanine by establishing and optimizing an orthogonal pair consisting of a tRNA and tRNA synthetase. After integration of the synthetic amino acid in vivo and UV irradiation, a position specific crosslink of binary protein-protein interactions was achieved which could be demonstrated with two model proteins. The crosslinked protein complexes could be purified and analysed by mass spectrometry which indicates a general applicability of this method for the identification of unknown interactions. Thereby, a valuable tool for Candida research was established.