Charakterisierung der Autophagozytosegene AUT9 und AUT1 in der Hefe Saccharomyces cerevisiae

Abstract

Um den Mechanismus der Autophagozytose näher zu untersuchen, werden in dieser Arbeit das Aut9p und das Aut1p in der Hefe Saccharomyces cerevuisiae lokalisiert und näher charakterisiert. Es wird gezeigt, dass AUT9 allelisch mit CVT7 ist. Die Deletion des AUT9-Gens hat keinen Einfluss auf die Vakuolenmorphologie in Saccharomyces cerevuisiae. Das Wachstum auf nicht fermentierbaren Kohlenstoffquellen ist ebenfalls ungestört. Das Aut9p konnte mit Hilfe einer N-terminalen Fusion mit dem grün fluoreszierenden Protein (GFP) in der Hefezelle an punktförmigen Strukturen im Zytosol lokalisiert werden. Die vesikelartigen Strukturen wurden von Noda, Kim et al. (2000) als neues Zellkompartiment identifiziert, und als Präautophagosom bezeichnet. Das Aut1p wurde als lösliches, zytosolisches Protein lokalisiert. Es konnte gezeigt werden, dass die Expression des Aut1p stark hungerinduziert ist. To understand the process of autophagocytosis in the yeast Saccharomyces cerevisiae, a set of mutants with a defect in this pathway has been isolated in our group. In this work, two of the involved proteins, Aut9p and Aut1p, are localized and further characterised. It is shown, that AUT9 is allelic to CVT7. The deletion of AUT9 has no influence to the vacuolar morphology in Saccharomyces cerevisiae. The growth of AUT9 deleted cells on non-fermentable carbon sources is normal compared to wildtype cells. To localize Aut9p in yeast cells, a N-terminal fusion with the green fluorescent protein (GFP) was cloned. GFP-Aut9p is located at punctate structures in the cytoplasm. Noda, Kim et al. (2000) showed that these vesicular structures are part of a new compartment in the yeast cell, the pre-autophagosome. The Aut1p was identified as a soluble, cytosolic protein. It could be shown, that the expression of Aut1p is significantly starvation induced.